Способ повышения биодоступности лекарственных средств RU 2328309

Гц. В облученный раствор вносят протеазу Bacillus subtilis до конечной концентрации 5 мг в 1 мл (соотношение полиэтиленоксид:протеаза равно 20:1). Смесь перемешивают 15 минут и получают препарат модифицированной протеазы в виде прозрачного раствора. Выход готового продукта составляет 99%.

Пример 10

5% водный раствор полиэтиленоксида, предварительно аэрированный барботажем кислорода, с молекулярной массой 4000 Да в 0,01 М фосфатном буфере с рН 7,4, содержащий 0,1 М хлорида натрия и протеазу Bacillus subtilis в концентрации 5 мг в 1 мл (соотношение полиэтиленоксид:протеаза равно 10:1), облучают УФ-лазерным излучением, длина волны излучения 308 нм, энергия импульса 100 мДж при длительности 25 нс и частоте 50 Гц. В результате получают препарат модифицированной протеазы в виде прозрачного раствора. Выход готового продукта составляет 99%.

На чертеже представлены данные о повышении энтеральной биодоступности протеаз Bacillus subtilis, модифицированных заявляемым способом. Энтеральную биодоступность исследовали по динамике изменения протеолитической активности (по гидролизу азоказеина) сыворотки крови у крыс линии Wistar в течение 8 часов после однократного внутрижелудочного введения в эквивалентных дозах немодифицированной протеазы и протеазы, модифицированной заявляемым способом. Как видно из представленных на чертеже результатов, немодифицированная протеаза при внутрижелудочном введении практически не обладает энтеральной биодоступностью и соотвественно в течение всего времени измерения не приводит к статистически значимому повышению протеолитической активности сыворотки крови. Модифицированные протеазы Bacillus subtilis, напротив, при внутрижелудочном введении обладают высокой энтеральной биодоступностью, что находит свое отражение в существенном увеличении протеолитической активности сыворотки крови, а именно более чем в 10 раз при сравнении максимальных величин активности протеаз в сыворотке крови у крыс.

В таблице 1 представлены данные об энтеральной биодоступности гепарина и гепарина, модифицированного заявляемым способом, при однократном внутрижелудочном введении мышам. Энтеральную биодоступность исследовали по изменению АПТВ (активированное парциальное тромбопластиновое время) сыворотки крови экспериментальных животных через 3 часа после внутрижелудочного введения в эквивалентных дозах (1250 ЕД в 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия) немодифицированного и модифицированного гепарина. Как видно из представленных в таблице 1 результатов, немодифицированный гепарин при внутрижелудочном (в/ж) введении практически не обладает энтеральной биодоступностью и соотвественно величина АПТВ сыворотки крови через 3 часа после его в/ж введения практически не отличается от АПТВ сыворотки крови мышей контрольной группы, которым был в/ж введен изотонический раствор хлорида натрия в эквивалентном объеме. При добавлении к сыворотке крови мышей контрольной группы селективного сорбента гепарина - гепасорб величина АПТВ также остается в пределах исходных величин, что свидетельствует об отсутствии в сыворотке гепарина в дозах, превышающих его физиологический уровень, то есть в сыворотке крови отсутствует гепарин, резорбированный из желудочно-кишечного тракта. Модифицированный гепарин, напротив, при в/ж введении обладает высокой энтеральной биодоступностью, что находит свое отражение в существенном увеличении (более чем в 3 раза) АПТВ сыворотки крови в опытной группе мышей. При добавлении к сыворотке крови мышей опытной группы гепасорба величина АПТВ снижается, что свидетельствует о том, что в сыворотке крови присутствует гепарин в дозах, значительно превосходящих его физиологический уровень, то есть в крови присутствует гепарин, резорбированный из желудочно-кишечного тракта.

В таблице 2 представлены данные по исследованию энтеральной биодоступности человеческого инсулина, модифицированного заявляемым способом, и немодифицированного инсулина. Энтеральную биодоступность оценивали по гипогликемическому действию инсулина на модели аллоксанового диабета у крыс. В опытной группе экспериментальным животным в/ж однократно введено по 1 мл модифицированного инсулина с активностью 50 МЕ/мл (соотношение полиэтиленоксид: инсулин равно 70:1). В контрольной группе животным введено по 1 мл немодифицированного человеческого инсулина с активностью 50 МЕ/мл.

Как видно из таблицы 2, модифицированный инсулин обладает выраженной гипогликемической активностью при в/ж введении крысам с аллоксановой моделью диабета, что свидетельствует о его высокой энтеральной биодоступности в сравнении с немодифицированным инсулином.

В таблице 3 приведены данные по сравнительному исследованию клинической эффективности в лечении хронической венозной недостаточности нижних конечностей немодифицированной ДНК в сочетании со стандартными методами лечения (контрольная группа) и монотерапией препаратом, содержащим ДНК, модифицированную заявляемым способом (опытная группа). Исследуемые препараты ДНК применялись в обеих группах per os. Клиническую эффективность проводимой терапии оценивали по стандартным параметрам электрореовазографии. Как видно из представленных результатов, электрофизиологические параметры венозной системы нижних конечностей в опытной группе свидетельствуют о значительно более выраженном лечебном эффекте при приеме ДНК, модифицированной заявляемым способом, что свидетельствует о ее высокой энтеральной биодоступности.

Заявляемый способ обладает универсальностью и может быть использован для повышения энтеральной биодоступности широко круга лекарственных средств, в частности инсулина, протеаз, гепарина и нуклеиновых кислот (ДНК и РНК).

Способ повышения биодоступности лекарственных средств

Таблица 3

 

 

 

 

Исследованные параметры

Контрольная группа

 

Основная группа

 

 

До лечения

После лечения

До лечения

После лечения

Скорость лимфатического оттока, Ом/с

0,17±0,02

0,2±0,02

0,18±0,02

0,25±0,02

Объем лимфатического оттока, Ом

0,26±0,02

0,28±0,03

0,25±0,02

0,32±0,03

Сопротивление лимфатическому оттоку, с/Ом

2,97±0,17

2,69±0,15

3,12±0,21

2,54±0,15

Скорость венозного оттока, Ом/с

0,25±0,02

0,28±0,02

0,22±0,02

0,31±0,02

Объем венозного оттока, Ом

0,31±0,03

0,37±0,03

0,33±0,03

0,42±0,42

Сопротивление венозному оттоку, с/Ом

3,35±0,24

2,96±0,18

3,19±0,22

2,73±0,16

1. Способ повышения энтеральной биодоступности лекарственных средств, включающий смешивание последних с водорастворимым полимером, отличающийся тем, что лекарственное средство смешивают с 5,0-50,0% предварительно аэрированным и облученным потоком ускоренных электронов или импульсным УФ-лазерным излучением раствором полиэтиленоксида с молекулярной массой 0,4-20 кДа в присутствии 0,01-0,1 М фосфатного буфера, рН 6,0-8,0 и содержащим 0,05-0,3 М хлорида натрия.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что раствор полиэтиленоксида аэрируют путем барботажа воздухом или кислородом в течение 30 мин при 4-8°С.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что раствор полиэтиленоксида облучают потоком ускоренных электронов или гамма-излучением в дозах 0,5-5,0 Мрад.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что раствор полиэтиленоксида облучают импульсным УФ-лазерным излучением с длиной волны 193-308 нм при энергии импульса 100-500 мДж, длительности импульса 15-25 нс и частоте повторения импульсов 50 Гц.

Яндекс.Метрика